环境消毒方法及效果的验证

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盖在预定时间和规定温度下(例如30~35℃或20~25℃)进行培养,用肉眼对微生物计数并识别,如必要还得鉴别菌种。此方法要求将培养基倒入培养皿中并使之隆起,要做到这一点操作上比较困难。⑶棉球擦抹法这是一种简单可行的方法,为制药企业普遍采用。消毒结束后,可对洁净室的机械表面、部及缝隙间、墙壁、窗台、试验台等表面的一定面积,用事先经过灭菌的生理盐水、精致水和缓冲液(例如磷酸缓冲生理盐水)润湿的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭,然后放入广口瓶,加一定量浸出液振摇(或作超声波洗涤),再对浸出液进行菌的培养。棉签取样能用于Rodac盘无法进行取样的场合,例如角落、缝隙等处。棉签可以由棉花和涤纶制成。如果棉签是由海藻酸钙做成的那就最好不过了,因为这种材料可溶于稀释液,这样便于将微生物释放在溶液中。⑷浸渍法棉签先用灭菌稀释液(如注射用水)湿润,然后擦拭取样区域,最后放入到一个装有经预测试的灭菌稀释液的试管中。样品应尽快进行测试,以免在稀释液中增加微生物数量。试管经搅动从棉签上释放出微生物,稀释液则注入培养基盘,经培养,然后计数并鉴别。消毒效果验证实例【示例1】。当相对湿度在65%以上、温度在24~40℃时,甲醛气体的消毒效果最好,但若采用过多的甲醛,会因聚合而析出白色粉末附着在建筑物或设备表面。一般甲醛的消毒方法如下。①消毒前先用丝绸浸注射用水擦洗房间建筑物表面和设备表面,然后用5%麝香草酚溶液喷洒和擦洗,静止1h后,再用丝绸浸注射用水再擦洗一次。②计算体积(包括房间和风管体积),按10ml/m3的比例准备浓度为36%的甲醛溶液(),按2~3g/m3的比例准备高锰酸钾溶液。:..在房间中放入试验装置,如不锈钢培养皿支架;Φ90mm双碟玻璃培养皿;枯草杆菌(TESPER-G)试纸,每试纸上枯草杆菌数量为1×106个,每个培养皿中放两个试纸,1做无菌试验,1做含菌数试验。培养皿的数量应根据房间面积确定。④消毒流程:在不锈钢容器中加入高锰酸钾,用双层纱布盖住桶口,再倒入36%浓度的甲醛溶液→甲醛气体扩散(约30min)→启动空调器让甲醛气体循环(约20min)→关闭通风系统,房间熏蒸消毒,时间不少于7h→房间排气,用新鲜空气置换(约2h)→开启空调系统→用75%酒精喷洒环境。⑤质监部门取样培养。判断标准:试纸枯草杆菌数量小于1×103个为合格。⑥%的新洁尔灭溶液擦洗机器表面;%新洁尔灭溶液或1%GermWarfare溶液或75%酒精喷洒建筑物四周。%新洁尔灭溶液与1%GermWarfare溶液每月轮换一次,%新洁尔灭,一周用1%GermWarfare。,需用全新空气换气若干小时,由于甲醛的环境标准只有(1~2)×10-6,要使环境中残留的甲醛浓度尽可能低至不致使人嗅出特殊臭味<×10-6,并对眼睛无刺激<×10-6,然后根据测定的室环境中甲醛残留量结果,正确设定换气时间,以保证在达到作业环境中无菌的前提下,对人身心健康不致产生不良影响。⑴取样方法及取样量在各取样场所,用约30ml的塑料待收集室空气,将袋空气用由吸收瓶、泵、气流计等组成的装置捕集至瓶吸收液中(样本数应≥3)。⑵%硼酸溶液20ml作为吸收液,用溶液吸收法,以1L/min的速度分别让各取样场所的空气通过10min,,,即得。⑶试验操作①,加5mol/,轻摇数次混匀后,室温放置20min。,摇2~5min至无气泡生成为止;,在波长550nm附近测最大吸光度。:..分别取甲醛标准液0、、、、、,,然后按①操作,测定吸光度,制出甲醛浓度(μg/ml)与吸光度的关系检量线。环境中的甲醛浓度(10-6)可由下式求出:+t甲醛浓度(10-6)=a××25×,μg/ml;V采样气体量,L;t采样时平均温度,℃;℃、1个大气压()下的体积,L;;25供试液全量,ml。⑷试液准备①:精取中国药典中规定“甲醛溶液①”1ml,加水准确至200ml作为甲醛稀释液。精取该液10ml至碘瓶,,再加1mol/L氢氧化锂溶液20ml。避光放置15min后,加15ml的10%硫酸,用硫代硫酸钠液()滴定。另用水10ml进行空白试验。(VA-VB)×(mg/ml)=,ml;,ml;()相对甲醛量,mg;10甲醛稀释液取样量,ml。:..b1000倍,即得。②AHMT溶液取4-氨基-3-肼-5-巯基-1,2,4-,,避光保存。需要说明的是,用甲醛消毒时也有不加高锰酸钾,而将甲醛直接放入空调器送入房间及用氨水中和的方法。不管采用什么方法,只要经过验证是可行的,都可以使用。【示例2】洁净室(区),如单个缓冲间、传递间等。⑴通过空气净化系统(HVAC)对房间进行消毒。根据洁净室(区)体积和HVAC系统的风管体积(或风量)、臭氧杀菌效果选用相应的臭氧发生器。可将主机置于空调系统的总送风管或回风管道的合适位置,电源控制系统置于机房。消毒时关闭相应的新风进口和回风排放阀门,使整个被消毒的洁净区空气通过净化系统风管形成循环,臭氧发生器即开始工作。如每日做空气灭菌,一般可开机1~;如每周以臭氧替代化学试剂熏蒸对表面、墙壁、地面及设备灭菌,一般可开机2~。其优点是:在被消毒的房间里不需要增加任何消毒设备,即可达到规标准的要求,保持良好的工作环境,也可直接安装在空气处理设备中,使臭氧发生器的安装与维护变的更加简洁和方便。⑵臭氧发生器直接放在房间使用。,设洁净室(区)体积为V1,HVAC系统风管容积为V2,V3为保持洁净区正压所补充的新风的臭氧消耗量。则消毒空间体积为:V=V1+V2+V3式中V3的确定根据消毒实践,归纳出较为可靠的经验公式如下:V=HVAC系统循环总风量(m3/h)×25%(假定新风补充量为25%)×10%(保持洁净区正压需补充的新风量)×%(计算应用臭氧半衰率的预算值):..V≈系统循环总风量×%《消毒技术规》的标准决定臭氧的浓度(C):对空气中浮游菌,臭氧灭菌浓度为(2~4)×10-6;对物体表面的沉降菌,为(10~15)×10-6(臭氧灭菌浓度参考卫生部1991年12月颁布的《消毒技术规》)。臭氧的半自然半衰期(S)参比状态下为20min左右;%;设计应用臭氧灭菌60min达到相对浓度后,继续保持一段时间(1~),即可达到对机器设备和建筑物表面沉降菌杀灭的目的。例如,消毒空间体积(V)为600m3,要求杀灭设备和建筑物表面沉降菌。按照上述要求空气中臭氧的浓度(C)应达到10×10-6,。臭氧发生器在工作1h后臭氧自然衰退率(S)%,则选择臭氧发生器的臭氧发生量W(mg/h):×600W===31200(mg/h1—S1—【示例3】工器具进入无菌室前的消毒验证工器具进入无菌室前必须在设备气闸室(也叫缓冲间、空气锁)先进行消毒,而人员不得通过设备气闸室直接进入无菌室。设备气闸室的两个门无论在什么时候都不能同时敞开,否则便回将无菌区暴露于外环境,以至危及无菌室的完整性。工器具进入无菌室前的消毒举例如下。一个操作者将它们搬入气闸室(但须避免横穿整个气闸室),进入后立即关上进门。然后根据规定的SOP,操作者对其进行消毒,完毕从进门处退出。待滞留达到规定时间后,另一操作者从无菌室另一侧进入气闸室并关上门,对第一个操作者曾触及的工器具部位及触及的地板的部位进行消毒,然后就可准备进入无菌室了。当滞留达到规定时间后,就能搬入无菌区。消毒验证立足于消毒的物件(如设备表面)的微生物量减少的结果。一般步骤如下:①消毒前先对工器具进行取样(取样点必须事先用书面规定)。②按标准程序对工器具进行消毒,但消毒操作人员不应知道何处已被取样或将被取样。:..规定的取样量相同,但取样区域应不相同。必须强调由书面规定消毒剂和取样点。所有的程序和实际操作都应该确保消毒恰当,包括消毒剂的制备、暴露时间、溶液温度、溶液寿命和使用方法等。下表是某一个设备消毒前后取样的例子。设备消毒前后的采样RODAC盘(P)或棉签样品号消毒前消毒后(S)1S左后轮右后轮2S左前轮右前轮3S#1右前角#1左前角4P第二层左中第二层右中5P第三层左中第三层右中6S把手右把手左7S#3左前角#3右前角8S#1左后角#1右后角9P第一层左中第一层右中10P第一层底部左中第一层底部右中④样品必须尽快交付实验室,一面在测试前发生细菌繁殖。⑤按合格标准判定。消毒是欲使微生物的数量减少至安全或相对安全的水平,现在必须提出的问题是何种污染程度是属“安全”或“相对安全”的,如对无菌室消毒来讲,理想的状态是所有进入无菌室的物件应该是无菌的。鉴于实际过程,应承认灭菌不总是能达到理想状态,合格的界限应根据设备的使用情况来确定。致病菌应完全杀死,其他洁净度级别环境的微生物污染请应保持在最低水平。设备消毒合格标准的界限应与无菌室环境监控的界限相同或相近。:..当的持续的减少。(三)环境消毒周期的确定消毒效果的验证必须能够证明一个选定物体(建筑、设备、空气等)的微生物数量在一定的条件下持续减少或灭杀。因此须从生物负载预研究和选择消毒剂开始,然后着眼于研究对消毒方法的平谷和数据收集分析来决定效果和重现性,因此消毒周期的确定也必须通过验证来达到。对于已确定和证明的方法和周期,则不必再重复。

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