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杂交瘤/噬菌体/单B三大单抗开发平台如何选择？

来源：泰然健康网时间：2024年12月26日 20:06

单克隆抗体（Monoclonal antibodies，mAb）是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体不仅是生物化学、分子生物学中必不可少的工具，其在医学上的应用也以革命性的速度改进了多种疑难杂症的治疗方法。

1975年Kohler和Milstein提出的杂交瘤技术（Hybridoma technology），证明了骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合，可以形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体—单克隆抗体，这种技术统称为杂交瘤技术使制备纯一抗体的难题获得了解决，为基础研究及其临床应用提供了无限潜力。

而在经过近50年的发展，单克隆抗体制备方法不再局限于杂交瘤技术（Hybridoma technology），噬菌体展示技术（Phage display）、人源抗体转基因小鼠（Human antibody-producing mice）和单B细胞抗体技术（Single B cell antibody technology）等技术也都陆续登上舞台。目前主流的三种技术平台杂交瘤技术、噬菌体展示技术、单B细胞抗体技术虽然有各自的局限性，但都已广泛应用于单克隆抗体筛选。

杂交瘤技术

杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。

杂交瘤技术的优点在于：

1.技术发展已经成熟，受到广大的认可

2.技术研发成本较低

缺点在于：

1.制备时间较长，重复生产性能差

2.效率低，脾细胞与骨髓瘤细胞的融合效率率低

3.有一定的局限性，不能制备无免疫性和高毒性的抗原的抗体

4.杂交瘤细胞生产不稳定，批次间差异大

5.抗体需要进一步人源化改造

噬菌体展示技术

噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编码基因或目的基因片段克隆入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下，使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表达，融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。

单抗制备中的噬菌体展示技术及噬菌体抗体库项技术，是抗体库技术的一个突破性进展，它在筛选时检测的不是细菌克隆的可溶性表达产物，而是噬菌体载体转化细菌后，融合表达在噬菌体颗粒表面上的Fab 或scFV，称为噬菌体抗体。通过多轮的抗原吸附-洗脱-扩增，最终筛选到的所需的抗体克隆，从而大大简化了筛选过程。筛选到的噬菌体抗体克隆可应用插入琥珀突变子及不能通读琥珀突变的受体菌获得可溶性的Fab 或scFV。

噬菌体展示技术的优点在于：

1.筛选时间短，可以灵活设计方案

2.在方法上可避开人工免疫阶段

3.可制备无免疫性和高毒性的抗原的抗体

缺点在于

1.重链轻链非天然配对

2.抗体形式以Fab或scFV为主

3.常用的噬菌体展示文库库容一般限制在10⁹，限制了开发过程中抗体分子多样性

单B细胞抗体技术

虽然杂交瘤技术和噬菌体展示技术已经在单克隆抗体生产中广泛应用，但它们依然存在较难克服的缺点制约着抗体生产过程。近些年，为了克服杂交瘤技术细胞融合效率低，噬菌体展示技术导致重链、轻链的天然同源配对丢失等问题，单B细胞抗体技术正被逐步开发和应用。

基于最新的单B细胞抗体发现技术的SingleB快速发现服务，结合了单细胞分离鉴定技术和高通量测序技术，以单个B细胞为起始点，快速获得抗原特异性抗体。SingleB快速发现服务适用于多个动物物种，抗体发现效率高、处理通量高。获得的抗体经体内天然成熟，具有丰富的基因多样性，可以为抗体药开发及多种下游应用，提供更多的候选抗体分子。